在培養(yǎng)箱內(nèi)進行明場和熒光觀察細胞運動，需要借助合適的設(shè)備，并掌握正確的操作方法和數(shù)據(jù)分析手段。以下是詳細介紹：

主要設(shè)備

CellAnalyzer箱內(nèi)明場 / 熒光多孔板活細胞工作站：可在培養(yǎng)箱環(huán)境中連續(xù)對多孔板中的活細胞進行明場和熒光成像，通過移動鏡頭對多孔板內(nèi)的細胞按區(qū)域依次成像，掃描結(jié)束后自動拼接成全板完整圖像。該設(shè)備支持遠程監(jiān)控和分析，硬件和電子器件能在 5-40°C 及 20-95% 的濕度環(huán)境下運行，兼容 6-384 孔多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、T25-T225 培養(yǎng)瓶等多種透明培養(yǎng)容器。

CellAnalyzer活細胞成像分析系統(tǒng)：可長期置于 CO?細胞培養(yǎng)箱中使用，兼容多種培養(yǎng)耗材，具備自動 X-Y-Z 軸定位、自動 / 手動對焦、Z-Stack 成像及區(qū)域掃描等功能，能夠?qū)崿F(xiàn)對細胞形態(tài)、增殖、遷移及熒光信號的實時監(jiān)測。系統(tǒng)標配明場通道和 GFP、RFP、DAPI 三色熒光通道，以及三個倍率的工業(yè)級鏡頭（4X、10X、20X），可實現(xiàn)便捷的箱內(nèi)實時圖像觀察及合成圖像輸出。

山東大學(xué)全自動活細胞監(jiān)控系統(tǒng)：可開放式地放在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，配備 4X、10X、20X 物鏡，具有紅、綠、藍三色熒光通道及明場通道，可同時進行四個光通道的延時成像。采用科研級高感光 CCD，配有全自動電動載物臺，能實現(xiàn) Z 軸自動聚焦、自動熒光通道切換、自動高通量圖像采集和疊加等功能，還可自主編輯并自動批量生成視頻，自動生成多種分析數(shù)據(jù)。

觀察方法

明場觀察：利用普通的透射光照明，直接觀察細胞的形態(tài)、輪廓和運動情況，適用于觀察細胞的整體形態(tài)、遷移、增殖等較為宏觀的動態(tài)變化。在培養(yǎng)箱內(nèi)進行明場觀察時，要注意選擇合適的光源強度和物鏡倍數(shù)，以獲得清晰的圖像。

熒光觀察：首先需要對目標細胞或分子進行特異性熒光標記，如用 CFSE 標記細胞 A，CellTracker Red 標記細胞 B，或者通過基因編輯讓細胞表達熒光蛋白等。然后選擇合適的熒光通道進行觀察，可實時追蹤細胞的運動、細胞間的相互作用以及分子的動態(tài)變化等。在熒光觀察過程中，要注意控制熒光激發(fā)光的強度和時間，避免對細胞產(chǎn)生光毒性，影響細胞的正常運動和生理狀態(tài)。

數(shù)據(jù)分析：結(jié)合時間序列的明場和熒光圖像，可通過軟件量化細胞運動的關(guān)鍵參數(shù)，如細胞的遷移速度、方向改變、運動軌跡等。例如，通過 TrackMate 插件可以追蹤細胞的運動軌跡，分析細胞運動的速度和方向變化；利用 ImageJ 或 CellProfiler 等軟件可以計算熒光信號的強度變化、共定位系數(shù)等，從而進一步了解細胞運動與細胞內(nèi)分子變化的關(guān)系。